
診斷試劑
diagnosis
背景
分子診斷技術(shù)里,引物和探針是核心。引物是人工合成的寡核苷酸序列,作為核苷酸聚合起始的關(guān)鍵引導分子,其長(cháng)度一般在18到27個(gè)堿基對,這與 Tm 值及特異性有關(guān),太長(cháng)(大于 38 個(gè)堿基對)會(huì )使延伸溫度超 74℃,超出 Taq DNA 聚合酶適宜反應溫度范圍,影響酶活性與 DNA 復制。
在PCR過(guò)程中,引物至關(guān)重要,是 DNA 聚合酶啟動(dòng)復制提供起點(diǎn)。一個(gè)引物與靶區域一端的模板鏈互補配對,另一個(gè)與另一端互補結合,為聚合酶指明起始位置。PCR 啟動(dòng)、溫度升高使 DNA 模板鏈解旋成單鏈后,引物依堿基互補配對原則與特定區域結合,DNA 聚合酶識別結合位點(diǎn),從引物 3’端添加核苷酸,沿 5’到 3’端延伸新鏈,循環(huán)往復實(shí)現 DNA 片段指數級擴增,引物就像建高樓的基石,保障 PCR 高效推進(jìn)。
探針是帶標記核酸序列,靠分子雜交與目標核酸序列特異性結合,精準探測目標。是分子診斷關(guān)鍵''利器'',可為DNA或RNA序列,帶有如“信號燈”般的標記物。生物樣本核酸分子多,無(wú)標記時(shí),探針與目標核酸結合的微弱信號易被淹沒(méi)。有標記物后,探針與目標序列結合,能通過(guò)放射性同位素自顯影、熒光染料發(fā)光或化學(xué)物質(zhì)顯色等發(fā)出易捕捉信號,助研究者了解目標核酸情況。
引物探針介紹
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數字PCR是一種精確計數目標序列拷貝數的方法。基于泊松分布,通過(guò)將待檢測樣本分成許多獨立的反應區塊(微滴或芯片上的微小反應室),每個(gè)區塊中只存在0個(gè)或1個(gè)目標序列。查看更多 |
qPCR是一種定量檢測目標序列拷貝數的方法。它基于標準曲線(xiàn)法,在PCR擴增過(guò)程中實(shí)時(shí)測量擴增產(chǎn)物的數量 查看更多 |
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